Одним из главных принципов уникальной «системы Физтеха», заложенной в основу образования в МФТИ, является тщательный отбор одаренных и склонных к творческой работе представителей молодежи. Абитуриентами Физтеха становятся самые талантливые и высокообразованные выпускники школ всей России и десятков стран мира.

Студенческая жизнь в МФТИ насыщенна и разнообразна. Студенты активно совмещают учебную деятельность с занятиями спортом, участием в культурно-массовых мероприятиях, а также их организации. Администрация института всячески поддерживает инициативу и заботится о благополучии студентов. Так, ведется непрерывная работа по расширению студенческого городка и улучшению быта студентов.

Адрес e-mail:

Остапченко Валерий Геннадиевич

Кратко:

Диссертант: Остапченко Валерий Геннадиевич Название диссертации: "Каталитическая субъединица энтеропептидазы человека: получение, характеризация ферментативных свойств и моделирование мутаций, облегчающих ренатурацию и повышающих специфичность фермента" Защита состоится: 20 декабря 2006 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета К 212.156.03 при Московском физико-техническом институте (государственном университете), по адресу 141700, Московская область, г. Долгопрудный, Институтский переулок, 9. Язык диссертации: русский Ученая степень, отрасль науки: кандидат физико-математических наук Шифр специальности: 03.00.02 – биофизика

Цель работы: Получение рекомбинантной каталитической субъединицы энтеропептидазы человека, исследование ее ферментативных и физико-химических свойств, моделирование структурных изменений, облегчающих ее ренатурацию, и исследование структурных элементов, ответственных за специфичность фермента при расщеплении пептидных субстратов.

Основные результаты:   Впервые осуществлена экспрессия каталитической субъединицы энтеропептидазы человека (L-HEP) в Escherichia coli в составе гибридного белка с тиоредоксином в качестве белка-носителя. Разработана процедура ренатурации гибридного белка тиоредоксин/L-HEP, позволяющая получать до 10 мг активного фермента с литра культуры. Впервые охарактеризована ферментативная активность каталитической субъединицы энтеропептидазы человека. Показано преимущество фермента человека по сравнению с ферментом быка при гидролизе рекомбинантных гибридных белков. Показана высокая устойчивость ферментативной активности L-HEP к действию денатурирующих агентов, таких как детергенты, повышенная температура, отличная от физиологической кислотность буфера и восстанавливающие агенты. Показано, что взаимодействие L-HEP с ингибиторами проходит по типу трипсин-подобных сериновых протеиназ. Показано, что высокие концентрации NaCl и CaCl2 ингибируют расщепление специфических субстратов L-HEP, при этом не влияя на скорость гидролиза неспецифических субстратов. Построена пространственная модель L-HEP. Проведено молекулярное моделирование замещения цистеинов в положениях 122, 136 и 201 с целью получения фермента с более высоким выходом ренатурации. Получен мутантный вариант L-HEP/C122S, выход ренатурации которого в 4 раза выше, чем у дикого типа. Показано, что ферментативные свойства L-HEP и L-HEP/C122S практически не отличаются. Выявлена вторичная специфичность L-HEP к хромогенным субстратам и белкам с  ароматическими и большими гидрофобными остатками в  положении Р2. С помощью методов молекулярного моделирования определено, что аминокислотные остатки в положениях 96 и 219 ответственны за различие ферментативных свойств легких цепей энтеропептидаз быка и человека. Получены мутантные варианты L-HEP с заменой остатков в этих позициях на соответствующие остатки каталитической субъединицы энтеропептидазы быка (L‑BEP). Показано, что остатки 96 и 219 влияют на константы связывания различных субстратов и частично определяют специфичность энтеропептидазы.

Результаты могут быть использованы в ИБХ РАН, Институте белка РАН, Центр "Биоинженерия" РАН, ИМБ РАН, Институте биохимии им. А.Н. Баха РАН.

Доступные материалы:

Текст автореферата (PDF, 2,38 Мб)
Если вы заметили в тексте ошибку, выделите её и нажмите Ctrl+Enter.

© 2001-2016 Московский физико-технический институт
(государственный университет)

Техподдержка сайта

МФТИ в социальных сетях

soc-vk soc-fb soc-tw soc-li soc-li
Яндекс.Метрика