Е.И. Филясова, А.В. Макаров, О..А. Ларионов
Московский физико-технический институт
Институт Биоорганической Химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова
Одним из важных этапов процедуры клонирования млекопитающих является партеногенетическая активация энуклеированных ооцитов, в которые было трансплантировано ядро донора.
В нашей группе проводится работа по клонированию млекопитающих,
используя малотравматичную модификацию микрохирургического метода
трансплантации ядер, предложенную Ларионовым и соавторами в 1988 году
(1). На ряду с существующими методами партеногенетической активации
ооцитов, такими как активация этанолом, активация с помощью кальциевых
ионофоров, активация с помощью электрических импульсов, наиболее
приемлемым методом для отрабатываемой процедуры клонирования является
активация ионами (2).
Целью работы являлась отработка данного метода активации. Для этого
исследовалось партеногенетическое развитие ооцитов в зависимости от
продолжительности обработки ионами . Эффективность оценивалась
по количеству бластоцист/морул на пятый день культивирования по
сравнению с общим числом активируемых ооцитов. На второй день после
активации практически у всех ооцитов, независимо от времени активации,
наблюдалась двухклеточная стадия, тогда как в контроле неактивированные
ооциты оставались на одноклеточной стадии. Наивысший процент бластоцист
наблюдался при активации ооцитов ионами
в течение четырех часов.
Следующим этапом работы является применение отработанного метода для активации ооцитов, в которые была проведена трансплантация ядра донора.
Литература
- О.А. Ларионов, Е.С. Платонов, О.В. Миронова, И.А. Васильева, Б.В. Конюхов. Журнал общей биологии XLIX, №2, 263-270, 1988.
- T. Wakayama, A.C.F. Perry, M. Zuccotti, K.R. Johnson, R. Yanagimachi. Nature 394, 369-374, 1998.
